sgRNA設計、高效率靶點(diǎn)載體構建、活性篩選
| 貨號 | 名稱(chēng) | 單位 | 價(jià)格 |
| JYSG-1 | 單靶點(diǎn)構建 | 個(gè) | 詢(xún)價(jià) |
| JYSG-2 | sgRNA套餐 | 套 | 詢(xún)價(jià) |
| JYSG-3 | sgRNA文庫設計合成構建（已完成人，鼠，豬，牛、羊，油菜，水稻等全庫或部分文庫的合成構建） | 個(gè) | 詢(xún)價(jià) |
1、根據客戶(hù)提供的基因信息，設計并構建至少3條或3對cas9/sgRNA表達載體，在293細胞或目的細胞中進(jìn)行活性篩選，最后提交錯配酶切結果及構建好的sgRNA表達載體。
圖：sgRNA活性篩選T7E1測試結果
2、高效率靶點(diǎn)載體構建（適用于哺乳動(dòng)物細胞）
（新穎的cas9表達系統，高效的編輯效率，省時(shí)，省費用?。?/strong>
CRISPR/Cas9基因編輯，即Cas9酶在gRNA引導下，靶向基因組并剪斷DNA，形成DNA雙鏈斷裂（DSB），細胞通過(guò)NHEJ和HDR兩種方式對DSB進(jìn)行修復，進(jìn)而產(chǎn)生片段或堿基缺失，插入，替換等，利用該特點(diǎn)進(jìn)行基因敲除（KO）和敲入(KI)。改造后的CRISPR/Cas9還可以實(shí)現基因激活、抑制和表觀(guān)遺傳調控等。
細胞基因編輯中幾個(gè)重要的影響因素：
1、 合適的Cas9酶和gRNA表達系統（哺乳動(dòng)物可選擇表達系統較多）
2、 設計篩選到高活性gRNA靶點(diǎn)（一般設計3-6個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行篩選，費時(shí)步驟）
3、 CRISPR質(zhì)粒的導入（轉染效率低的細胞編輯效率很低，實(shí)驗很難進(jìn)行）
4、 單克隆篩選（如果編輯效率低，將更加費時(shí)費力）
吉熒生物提供新型CRISPR 表達系統，上述問(wèn)題迎刃而解!
原理：該載體是一種可以在細胞中復制的載體，就像普通質(zhì)粒在細菌中復制一樣。高效CRISPR質(zhì)粒上包含了所有基因編輯元件和篩選基因，屬于A(yíng)ll-In-One vector，使用非常簡(jiǎn)單，只要將質(zhì)粒轉入細胞中，用嘌呤霉素篩選幾天就可以敲除基因，效率可高達100%（見(jiàn)下圖）。
高效CRISPR的優(yōu)點(diǎn)總結如下：
1. 可以長(cháng)時(shí)間編輯細胞，實(shí)現高效的基因敲除
2. 載體含有Puromycin抗性基因，可以富集轉染成功的細胞，不受轉染效率影響
3. 載體含有GFP，可以監測轉染效率，還可以用流式分選細胞
4. 載體可以同時(shí)表達兩個(gè)gRNA，編輯兩個(gè)基因或者敲除一段DNA片段
5. 撤除篩選藥物后，高效表達質(zhì)粒在一周內迅速丟失，編輯好的細胞不再含有外源基因
載體圖及案例展示
第15天獲得接近100%的編輯效率?。盖形稽c(diǎn)的突變）
訂購注意事項：
1、 您提供基因名稱(chēng)（基因ID）
2、 我們提供構建好gRNA靶點(diǎn)的高效CRISPR載體(含puro，GFP雙篩選標記)
周期約10工作日
參考文獻：[1] Xie et al. An episomal vector-based CRISPR/Cas9 system for highly efficient gene knockout in human pluripotent stem cells. Sci Rep. 2017 May 24;7(1):2320.
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