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GeneBiogist 無(wú)縫克隆試劑盒

介紹

不同于普通分子克隆方法，GeneBiogist 無(wú)縫克隆試劑盒通過(guò)簡(jiǎn)單的體外一步（同源重組）實(shí)現DNA克隆。該方法 極大簡(jiǎn)化了克隆過(guò)程，無(wú)論是單鏈DNA，還是大到幾百kb的DNA片段，均可以高效完成克隆構建。只需將 載體質(zhì)粒線(xiàn)性化，再用PCR法將與載體質(zhì)粒同源區（約15bp）導入插入片段（Inserts）兩端，混合后加入重組酶，即完成質(zhì)粒構建。該方法可以一步實(shí)現多個(gè)片段按順序同時(shí)插入載體質(zhì)粒中。

特點(diǎn) 1. 比傳統克隆方法更簡(jiǎn)單，步驟更少，試劑需求也少，整個(gè)流程時(shí)間更短。

2. 可同時(shí)插入多個(gè)插入片段，無(wú)需尋找合適的酶切位點(diǎn)。

3. PCR產(chǎn)生的片段無(wú)需酶切，線(xiàn)性化載體可以通過(guò)酶切或PCR方法產(chǎn)生。

4. 重組產(chǎn)生的DNA接頭處不引入任何多余堿基，有利于融合蛋白或核糖體結合位點(diǎn)RBS的構建。

5. 可用于將線(xiàn)性化DNA重新連接成環(huán)狀，適合定點(diǎn)突變操作。

6. 只要是可以PCR的DNA片段，均可用該克隆試劑盒。

7. 插入n個(gè)DNA片段與一個(gè)片段所花費的時(shí)間是一樣的。

保存 -20℃保存18個(gè)月（此溫度下不會(huì )凍結，無(wú)需分裝）；冰袋運輸。

克隆流程

1. 設計用于擴增插入片段（和/或載體質(zhì)粒）的引物序列，引物上攜帶合適的重疊序列。

2. 用高保真聚合酶PCR擴增插入片段。（無(wú)需考慮產(chǎn)物末端有無(wú)A尾，重組過(guò)程中將被去除，在最終質(zhì)粒中不會(huì )出現）

3. 用高保真酶PCR擴增（或酶切）將載體質(zhì)粒線(xiàn)性化。

4. 測定插入片段和線(xiàn)性化載體的濃度。

5. 將插入片段和線(xiàn)性化載體加入Lightening Cloning Master Mix溶液中，50℃水浴15 min。

6. 轉化DH5α等感受態(tài)細胞。