使用方法
1. 用37℃水浴解凍細胞凍存液,并上下振蕩數次混勻。
備注:為了盡量減少污染,未使用完的細胞凍存液最好凍回-20℃,反復凍融不影響使用效果。有沉淀
屬于正常情況,主要為DMEM高糖培養基中的脂類(lèi)與鹽類(lèi)的析出。
2. 用細胞消化液將生長(cháng)良好的細胞消化成單細胞,并用細胞計數器或血球計數板計數細胞濃度。
備注:懸浮細胞不需要消化但仍需要細胞計數,不易消化成單細胞的各種293細胞等最好使用含有EDTA
的胰酶進(jìn)行消化。
3. 用低速離心沉淀細胞,棄去上清。
備注:通常2000~3000rpm離心5~10min即可。
4. 用適量細胞凍存液重懸細胞。
備注:細胞濃度可根據情況調整為1~5×106/ml,通常為3×106/ml左右。
5. 按每管1ml分裝到細胞凍存管中。
6. 直接放入-70℃冰箱中凍存。
備注:無(wú)需程序降溫盒或從4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁瑣程序降溫。
7. 24小時(shí)后轉入液氮中凍存。
備注:對于不同細胞,使用本細胞凍存液也可在-70℃冰箱中保存數周甚至數月,但建議最好盡快轉入
液氮中保存。
8. 復蘇方法同常規細胞凍存液。
備注:對于大多數對DMSO不敏感的細胞,復蘇時(shí)甚至傳代前無(wú)需去除細胞凍存液,實(shí)際上本細胞凍存
液中某些成分具有一定的促細胞生長(cháng)特性。