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  • 產(chǎn)品分類(lèi)
    CRISPR/Cas9基因敲除敲入
    shRNA/sgRNA載體構建,活性篩選
    siRNA/ASO/Gapmer/saRNA
    miRNA/piRNA/aptamer
    mRNA/circmRNA合成&LNP包封
    蛋白表達分子細胞實(shí)驗
    病毒包裝
    質(zhì)粒及載體構建
    轉染試劑 Celopener?
    細胞及細胞永生化
    其他產(chǎn)品&優(yōu)勢服務(wù)

    GeneBiogist one-step哺乳動(dòng)物細胞凍存液

    GeneBiogist one-step哺乳動(dòng)物細胞凍存液推薦用于常規哺乳動(dòng)物細胞的冷凍保存,無(wú)需程序降溫,可直接放入-70℃保存。該凍存液以DMEM為母液,含有DMSO,不含牛血清或其他蛋白成分。
    具有高效、低毒、無(wú)外源因子和易于使用等優(yōu)點(diǎn)。    
     
    使用方法
    1. 用37℃水浴解凍細胞凍存液,并上下振蕩數次混勻。
    備注:為了盡量減少污染,未使用完的細胞凍存液最好凍回-20℃,反復凍融不影響使用效果。有沉淀
    屬于正常情況,主要為DMEM高糖培養基中的脂類(lèi)與鹽類(lèi)的析出。
    2. 用細胞消化液將生長(cháng)良好的細胞消化成單細胞,并用細胞計數器或血球計數板計數細胞濃度。
    備注:懸浮細胞不需要消化但仍需要細胞計數,不易消化成單細胞的各種293細胞等最好使用含有EDTA
    的胰酶進(jìn)行消化。
    3. 用低速離心沉淀細胞,棄去上清。
    備注:通常2000~3000rpm離心5~10min即可。
    4. 用適量細胞凍存液重懸細胞。
    備注:細胞濃度可根據情況調整為1~5×106/ml,通常為3×106/ml左右。
    5. 按每管1ml分裝到細胞凍存管中。
    6. 直接放入-70℃冰箱中凍存。
    備注:無(wú)需程序降溫盒或從4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁瑣程序降溫。
    7. 24小時(shí)后轉入液氮中凍存。
    備注:對于不同細胞,使用本細胞凍存液也可在-70℃冰箱中保存數周甚至數月,但建議最好盡快轉入
    液氮中保存。
    8. 復蘇方法同常規細胞凍存液。
    備注:對于大多數對DMSO不敏感的細胞,復蘇時(shí)甚至傳代前無(wú)需去除細胞凍存液,實(shí)際上本細胞凍存
    液中某些成分具有一定的促細胞生長(cháng)特性。

     

     

    常見(jiàn)問(wèn)題:

    1、能否用于干細胞與原代細胞凍存

    有客戶(hù)用于小鼠的胚胎干細胞,效果不錯。因為干細胞與原代細胞,細胞要求較高,可以提供小樣客戶(hù)測試,但是我們自己沒(méi)有做過(guò)干細胞及原代細胞、免疫細胞的相關(guān)測試。


    2、能否用于懸浮和貼壁細胞凍存

    可以。我們客戶(hù)里很多都是用于貼壁細胞的凍存的,貼壁細胞,凍存過(guò)程沒(méi)有特別操作。只是在貼壁細胞轉移或者傳代過(guò)程中,需要先用胰酶消化,再吹懸浮,然后再進(jìn)行轉移。


    3、能否用于人血小板凍存

    沒(méi)有試過(guò)。凍存細胞一般只要鹽離子濃度合適即可,客戶(hù)可根據需求自行嘗試


    4、凍存ESC和RSC96細胞復蘇率很低,如何處理

    ESC是胚胎干細胞,RSC96是原代細胞,我們的產(chǎn)品是推薦用于常規哺乳細胞凍存,胚胎干細胞和原代細胞都沒(méi)有做全面測試,有的能用,有的不能用,需要客戶(hù)測試后購買(mǎi)和正式使用。因為客戶(hù)凍存的不是我們產(chǎn)品售后范圍內,類(lèi)似的情況我們不能做退換貨處理。


    5、2X凍存液如何使用

    吸出原孔一半液體,加入等體積2M凍存液搖勻后即可


    6、細胞在-80℃可以保存多久

    目前檢測了3年,一般情況下建議短期內使用的可以放到-80℃冰箱,但是因-80℃冰箱變數較大,如使用人員多、長(cháng)時(shí)間多次打開(kāi),經(jīng)常清點(diǎn)等因素,長(cháng)期保種可以從-80℃轉入液氮。


    7、凍存液顏色有差異

     
    我們的凍存液使用的是DMEM高糖培養基作為母液來(lái)配制,DMEM高糖培養基含有酚紅,因此在分液的前后由于培養基與CO2接觸時(shí)間與面積變化,導致ph變化,從而發(fā)生顏色的變化,顏色對凍存效果無(wú)影響。


    8、凍存液中有沉淀

    沉淀是DMEM高糖培養基中的鹽分與脂類(lèi),凍存液在-20℃冰箱取出來(lái)后,直接在37℃水浴鍋中溶解,或4℃過(guò)夜溶解后,第二天拿到37℃水浴鍋中平衡溫度,搖勻后直接使用,沉淀對凍存液效果無(wú)任何影響。


    9、凍存液能否在室溫長(cháng)期保存

    可以,但是不建議。在4℃和常溫下,如果掉入一個(gè)細菌,細菌是可以正常生長(cháng),導致細胞的污染,細菌在-20℃無(wú)法生長(cháng),復蘇后抗生素可以抑制細菌的生長(cháng),細胞培養不會(huì )被污染。


    10、是否準備做備案用于免疫細胞或細胞治療的細胞凍存

     

    暫時(shí)不計劃做備案。

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